Научный журнал
Международный журнал экспериментального образования

ISSN 2618–7159
ИФ РИНЦ = 0,440

ПОДБОР КЛЕТОЧНЫХ СИСТЕМ ДЛЯ РАБОТЫ С ЭНТЕРОВИРУСАМИ

Миронова Л.Л. Попова В.Д. Конюшко О.И. Грачев В.П.
По завершении действия международной Программы ликвидации полиомиелита в 2002 году благополучия в этом вопросе достичь не удалось: возникли случаи вакциноассоциированного паралитического полиомиелита (ВАПП). По данным ВОЗ, с 2000 по 2009 годы в 11 странах зарегистрировано 383 случаев ВАПП (1 случай на 520 тысяч детей, привитых первой дозой оральной вакцины) [1]. По другим данным, этот показатель составляет 1 случай на 1,6 млн. распределенных доз оральной полиовакцины [2]. Такая ситуация привела к изменению в Национальном календаре прививок РФ, в соответствии с которым вводится другая схема вакцинации: в 3, 4, 5, 6 месяцев применяют инактивированную вакцину, в 18, 20 месяцев и в 14 лет - оральную полиомиелитную вакцину (Приказ МЗ РФ № 673 от 30.10.07 г.). Создавшееся положение указывает на необходимость дальнейшего проведения мероприятий по усовершенствованию надзора за полиомиелитом в рамках той же Программы по ликвидации полиомиелита [2].

Нами было проведено изучение чувствительности к заражению вакцинными штаммами Сэбина вируса полиомиелита трех типов авторских линий диплоидных и гетероплоидных клеток человека и животных. Исследования были совмещены с работой по ревизии криобанка авторских линий перевиваемых клеток. При этом вирусы служили индикаторной системой, свидетельствующей о сохранности биологических свойств линий клеток после длительного пребывания в жидком азоте (от 13 до 27 лет). В процессе ревизии было восстановлено 530 единиц хранения. У восстановленных линий процент жизнеспособных клеток варьировал от 47 до 89,6. Из них созданы новые единицы хранения на разных уровнях пассажей.

В результате ревизии в криобанке осталось 26 линий - 12 линий диплоидных клеток человека и 14 линий перевиваемых клеток животных. Мы подбирали культуры клеток для установления линий, в которых могли размножаться штаммы вирусов, применяемых в нашем Институте для изготовления вакцин. По мнению экспертов ВОЗ, не существует ограничений в использовании различных линий перевиваемых клеток для создания медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) при единственном условии - доказать их безвредность в каждом отдельном случае.

Следует обратить особое внимание на то, что до сих пор основные противовирусные вакцины готовят на первичных культурах клеток, несмотря на то что этому субстрату присущи недостатки: высокая частота контаминации эндогенными агентами, в том числе патогенными для человека, нестандартность, постоянная потребность в животных - донорах исходной ткани, невозможность приготовить крупные партии культур из ткани одного донора. Главный санитарный врач Г.Г. Онищенко отмечает, что РФ отстает от ряда стран мира в разработке и совершенствовании вакцин, указывая на отсутствие у нас противомикробных вакцин, производства инактивированной вакцины против полиомиелита, ротавирусной инфекции, краснухи. В нашем распоряжении имеются линии перевиваемых клеток, чувствительные к заражению этими вирусами, но, по мнению Г.Г. Онищенко, перевод финансирования ведущих научно-исследовательских Центров на бюджетную основу мешает осуществлению налаживания производства отечественных препаратов [3].

В 508 опытах изучали чувствительность линий перевиваемых клеток к вакцинным штаммам Сэбина вируса полиомиелита трех типов. Вирус вводили в разведениях 1:500, 1:1000, 1:5000. Устанавливали степень репродукции вирусов до и после криоконсервации клеток. Для определения титров использовали культуру 4647. Статистическую обработку полученных результатов осуществляли определением коэффициента вариации, который позволяет оценивать вариабельность признака в нормированных границах. В результате изучения было установлено, что после длительного хранения клеток в жидком азоте они не потеряли чувствительность к вакцинным штаммам Сэбина. Вариации значений титров наблюдали и до замораживания клеток. В связи с полученными результатами линии М-7, 22, 25, 29, могут быть использованы для производства оральной полиомиелитной вакцины, а линия 4647 - для выпуска инактивированной полиовакцины. Это возможно потому, что данные культуры прошли полное обследование на безопасность и удовлетворяют всем требованиям национальных и международных контрольных органов к вакцинным субстратам [4, 5].

В последние годы во многих странах мира - Китай, Монголия, США, Канада, Япония, Болгария, Российская Федерация и др. отмечен рост вспышек, вызванных неполиомиелитными энтеровирусами различных серотипов. В 2008 году утверждена Программа «Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции на 2009-2011 годы». В 2008 году в 68 субъектах РФ зарегистрировано 6025 случаев энтеровирусной (неполио) инфекции (4,2 на 100 тысяч населения). В 2007 - в 62 субъектах - 6452 случая, показатель 4,5 на 100 тысяч населения. Для изучения этиологии и эпидемиологии отдельных случаев и эпидемий энтеровирусных заболеваний всегда требуется рациональная лабораторная диагностика. Наличие доступных и надежных диагностикумов позволяет объективно оценить степень распространения инфекции, создать основу для планирования и проведения профилактических и противоэпидемических мероприятий. При установлении чувствительности авторских линий, сохраняемых в жидком азоте, к энтеровирусам, были использованы линии диплоидных клеток человека и линии гетероплоидных клеток животных. Всего проведено 320 заражений. Энтеровирусы размножались на клетках линий М-8, 22, 29. На последних двух культурах не размножался вирус Коксаки В-1. Из линий гетероплоидных клеток оказались чувствительными к испытуемым энтеровирусам следующие культуры: 455, 2688М, 4647, РАМТ, 4647 ТК-, 4647- гибрид II, 4664, 10251. Клетки 2688С и 4184 не поддерживали размножение ECHO-16. Линия клеток Таурус-1 оказалась полностью нечувствительной ко всем испытуемым вирусам. Таким образом, все чувствительные культуры могут быть использованы в качестве исследовательских моделей и диагностикумов соответствующих вирусов.

В опытах прошлых лет также изучали чувствительность некоторых культур к неполиомиелитным энтеровирусам. На клетках линии 4647 титры вируса Коксаки А-7, 14, 16 колебались от 5,7 до 7,00, Коксаки В-1-5 от 6,00 до 7,10 ТЦД50/мл. Титр ECHO -11 достигал 7,50 на клетках линии 455, титр Коксаки А-7 составлял 7,2, Коксаки А-9 - 5,00, А-14 - 7,00, Коксаки В-1 - 6,0, В-5 - 6,0, ECHO-1 - 7,20, ECHO-11,12 - 6,0, 19 - 7,40 ТЦД50/мл. При заражении культур клеток африканских зеленых мартышек вирусом Коксаки А-7 был установлен титр 7,50, А-14 - 6,50, А-16 - 7,0, Коксаки В-1-5 от 6,50 до 6,90 ТЦД50/мл. В клетках линии 4184 титр вируса Коксаки В-1-3 колебался от 6,11 до 7,70, Коксаки В-5-равнялся 6,33, В-6 - 6,20 ТЦД50/мл. На клетках линии М-22 на уровне 24 пассажа установлен титр ECHO-11-7,50 ТЦД50/мл.

На наш взгляд, проведенное изучение энтеровирусов вполне актуально и своевременно.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Сейбиль В.Б., Малышкина Л.П., Чернявская О.П. Современное состояние проблемы ликвидации полиомиелита. Медицинская вирусология. Т. XXVI. М., 2009. С.42-43.
  2. Иванова О.Е. Вирусологический мониторинг как ключевой элемент выполнения в Российской Федерации Программы ликвидации полиомиелита. Автореферат дисс. д.м.н. М., 2009. 49 с.
  3. Онищенко Г.Г. О мерах по обеспечению биологической безопасности на территории Российской Федерации. ЖМЭИ. 2008. № 5. С. 54-57.
  4. Миронова Л.Л., Преображенская Н.К., Грачев В.П. и др. Штамм диплоидных клеток кожи и мышц эмбриона человека, используемый для культивирования вирусов. Авт. свид. № 1317021. 1987. Патент от 22.03.93.
  5. Миронова Л.Л., Грачев В.П., Кузнецова Н.В., Попова В.Д. Способ культивирования вирусов. Авт. свид. № 770195. 1980. Патент от 22.03.93.

Библиографическая ссылка

Миронова Л.Л., Попова В.Д., Конюшко О.И., Грачев В.П. ПОДБОР КЛЕТОЧНЫХ СИСТЕМ ДЛЯ РАБОТЫ С ЭНТЕРОВИРУСАМИ // Международный журнал экспериментального образования. – 2010. – № 7. – С. 37-39;
URL: http://expeducation.ru/ru/article/view?id=513 (дата обращения: 20.08.2018).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252