В природных и производственных условиях нашего времени организм нередко испытывает влияние жестких факторов окружающей среды. Картину патофизиологических изменений организма подтверждает анализ крови [1]. Белые клетки крови, имея высокую реактивность, быстро включаются в адаптационные реакции. Они способны к неспецифическому реагированию в ответ на стрессогенные воздействия. Красные кровяные клетки также способны отразить динамику изменений при проведении биохимических исследований [3]. При этом чувствительным показателем, отражающим антиоксидантное равновесие организма, является состояние плазматической мембраны эритроцитов. Под действием осмотических сил вода поступает из гипотонического раствора внутрь эритроцитов. Они набухают, мембрана их растягивается, а затем под действием механических сил разрушается. При этом раствор, содержащий кровь, становится прозрачным и приобретает ярко-красный цвет («лаковая кровь»). Осмотический гемолиз эритроцитов здорового человека начинается в 0,46–0,48 % растворах натрия хлорида и полностью завершается (разрушаются все эритроциты, и образуется «лаковая кровь») в 0,32–0,34 % растворах той же соли [5].
Исследование состояния осмотического гемолиза эритроцитов при модуляции стрессорных воздействий является целью работ многих ученых [2, 3, 4]. Особый научный интерес вызывают особенности осмотической резистентности эритроцитов при экспериментальной термической травме.
В связи с этим целью исследования явилось изучение осмотической резистентности эритроцитов при экспериментальной термической травме у крыс разного пола.
Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:
• выявить особенности осмотического гемолиза эритроцитов при экспериментальной термической травме у крыс
• сравнить степень осмотической резистентности эритроцитов в зависимости от пола животных – крыс самок и самцов.
Работа проводилась на кафедре биологии и ботаники Астраханского государственного медицинского университета в весенний период 2016 года. В эксперименте участвовало 40 животных обоего пола в возрасте 7 месяцев, средней массой 230 гр. Все процедуры, связанные с животными, выполнялись в полном соответствии с Приказом № 199 н Минздрава России от 1 апреля 2016 г.
Животные обоего пола были разделены на 4 группы по типу воздействия:
I группа (n=10: 5 самцов, 5 самок) – контрольные животные, не подвергшиеся ожоговому воздействию;
II группа (n=10: 5 самцов, 5 самок) – контрольные животные, подвергшиеся ожоговому воздействию (раны регенерировали естественным путем);
III группа (n=10: 5 самцов, 5 самок) – животные, получавшие аппликации кожи бальзамом «Спасатель» после ожогового воздействия;
IV группа (n=10: 5 самцов, 5 самок) – животные, получившие термический ожог и накожное нанесение спрея «Д-пантенола».
У самок изучались влагалищные мазки для определения фазы эстрального цикла, когда результаты исследований могут быть некорректными. Эксперимент с самками проводился в фазы диэструса и метаэструса.
Осмотическая резистентность эритроцитарной мембраны крови крыс определялась по устойчивости к различным концентрациям гипотонического раствора хлорида натрия – от 0,7 до 0,2 % [4]. Кровь собирали при декапитации крыс в пробирки с антикоагулянтом -гепарином в концентрации 150 ед/мл крови. В каждую пробирку вносили по 0,02 мл крови крыс и оставляли на 30 мин при комнатной температуре. После центрифугирования 10 мин 2000 оборотов определяли начало и окончание гемолиза [5]. Все анализы проводили в день забора крови.
Опыты показали, что термический ожог области спины крыс способствует наиболее полному гемолизу эритроцитов крови крыс (максимальная степень резистентности эритроцитов ≈ 7 %, p<0,001). Лечение ожогов кожи бальзамом «Спасатель» вызывает средний гемолиз (степень резистентности – 4,02 %, р<0,05), при терапии ожоговых травм межлопаточной области спины крыс спреем Д-пантенол наблюдалось начало гемолиза (минимальная устойчивость эритроцитов 3,64 %, Р<0,05)
Анализ данных по определению осмотического гемолиза эритроцитов белых крыс после термического воздействия показал, что максимальная осмотическая резистентность эритроцитов у молодых особей разного пола не имеет существенных различий. В пробирках биоматериала самок и самцов крыс, подвергшихся ожоговому воздействию, наблюдалось появление светло-алой окраски крови, что вызвано, на наш взгляд, низкой активностью плазмы крови, с ускорением дегенерации эритроцитов из-за утоньшения толщины и целостности цитоплазматической мембраны эритроцитов. При этом минимальная устойчивость эритроцитов к гипотонической провокации значительно повышалась у самцов крыс, чем у самок. Эритроциты с низкой резистентностью мембраны в крови самок имеют меньший протекторный потенциал из-за пролонгации их цикла жизни, вызванной антиоксидантными свойствами эстрогенов самок.
В заключение стоит отметить, что свойства эритроцитов (форма, осмотическая резистентность) индивидуальны для каждого животного, зависят от пола и сезона исследования. Термический ожог, как стресс-фактор, снижает устойчивость мембраны эритроцитов к малодозной солевой провокации. В условиях лечения ожогов кожи аппликациями бальзамом «Спасатель» и мазью «Д-пантенол» осмотическая резистентность эритроцитов становится оптимальной. Таким образом, установлен положительный эффект указанных терапевтических средств на минимальную осмотическую резистентность на фоне термического воздействия у молодых крыс.