Scientific journal

International Journal of Experimental Education

ISSN 2618–7159

ИФ РИНЦ = 0,425

В настоящей работе представлены результаты исследований поведенческих реакций у старых крыс, леченных полиоксидонием. Проведены 2 серии эксперимента:1-серия – интактные старые крысы; 2 серия – старые крысы, получавшие полиоксидоний (ПО) в течение 10 суток внутримышечно. Контрольная группа получала эквивалентный обьем физиологического раствора 0,9 % NaCl. В каждой серии было по 10 животных. Изучение поведенческих реакций проводилось в СУОК-тесте. В результате проведенных исследований было установлено, что под влиянием полиоксидония у старых крыс в Суок-тесте уже в первом сроке исследования наблюдалось улучшение параметров исследовательского поведения на фоне снижения тревожно-фобического поведения. Между тем, полиоксидоний не оказывал влияния на мотосенсорную дезинтеграцию поведенческого паттерна старых крыс, что не способствовало нарастанию у них исследовательской активности во втором опытном сеансе.

Исследование вопросов старения становится все более актуальным по мере увеличения средней продолжительности жизни населения. У пожилых людей одним из наиболее частых неврологических симптомов является нарушение когнитивных функций [1]. По мнению Дамулина И.В., когнитивные функции связаны с интегрированной деятельностью головного мозга в целом, когнитивная недостаточность закономерно развивается при самых разнообразных очаговых и диффузных поражениях головного мозга [2].Особенно часто когнитивные расстройства возникают в пожилом возрасте. Современная тенденция к увеличению продолжительности жизни и соответственно к увеличению числа пожилых лиц в популяции делает проблему когнитивных нарушений крайне актуальной [2, 3].

В настоящее время поиск новых возможностей улучшения мозговой деятельности путем использования препаратов, предотвращающих деградацию или регулирующих нарушение функции головного мозга, может обеспечить антидепрессивный эффект, способствовать улучшению памяти и предотвращать снижение когнитивных возможностей в процессе старения [4]. Нашими предыдущими исследованиями было установлено, что полиоксидоний в тесте «открытое поле» оказывал существенное воздействие на поведенческие реакции крыс, активируя ориентировочно-исследовательские реакции и улучшая эмоциональное состояние опытных крыс [5]. В связи с этим, целью настоящего исследования явилось изучение в СУОК-тесте поведенческих реакций у опытных крыс, получавших полиоксидоний.

Материалы и методы исследования. Эксперименты выполнены на 20 белых крысах-самцах массой тела свыше 350 г ± 10 %. Проведены 2 серии эксперимента: 1-серия – интактные старые крысы; 2 серия – старые крысы, получавшие полиоксидоний (ПО) в течение 10 суток внутримышечно. Контрольная группа получала эквивалентный обьем физиологического раствора 0,9 % NaCl. В каждой серии было по 10 животных.

Регистрацию поведенческой активности крыс оценивали по методу Суок-тест, который описывает поведение животных в условиях новизны. Большую роль играет баланс мотиваций – стремление исследовать новую обстановку (неофилия) и страх перед ней (неофобия, тревога) – в формировании поведения животного в данных условиях. Суок-тест основан на тестировании животного на приподнятой 2-метровой аллее диаметром 6 см. Аллея разделена на равные 10 см сектора и зафиксирована на высоте 20–25 см при помощи торцевых стенок. При тестировании животное помещается в центр аллеи, который окружен сегментами слева и справа, формирующими условную «центральную» зону (20 см). Исследование поведенческой активности крыс проводилось в течение 5 минут, движение крыс записывалось на видеокамеру. По видеоматериалам определялись следующие показатели: латентность выхода, переходы, болюсы, количество пересеченных сегментов (горизонтальная активность), в том числе и центральных, вертикальная активность, количество исследовательских заглядываний вниз, ориентации (направленные в стороны движения головой при вытянутом положении тела), число соскальзываний лап, а также суммарная продолжительность периодов неподвижности (замирания) [6]. Через 7 суток проводили проверку энграмм памяти, повторяли тестирование животных в Суок тесте.

Медико-биологические эксперименты и доклинические исследования на животных будут проводиться согласно «Правилам проведения доклинических исследований, медико-биологических экспериментов и клинических испытаний в Республике Казахстан» утвержденным приказом Министра здравоохранения Республики Казахстан от 25 июля 2007 года № 442 в соответствии с Госстандартом Республики Казахстан «Надлежащая лабораторная практика. Основные положения», утвержденным приказом Министра индустрии и торговли РК. В исследовании будут учитываться рекомендации, изложенные в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» /под ред. Р.У. Хабриева, Москва, 2005 г. При проведении экспериментов руководствовались рекомендациями, изложенными в «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и научных целях», Страсбург 18 марта 1986 г. Решение локальной этической комиссии КазНМУ имени С.Д. Асфендиярова, выписка из протокола № 9 от 30 октября 2014 года.

Процедуры статистического анализа выполнялись с помощью ППП SPSS-16, STATISTIKA – 7. Количественные данные представлены в виде Ме (25 %-75 %), где Ме – медиана, 25 %-75 % – интерквартильный размах. Для проверки совпадения распределения исследуемых количественных показателей с нормальным в группах был использован критерий согласия Колмогорова-Смирнова. В виду того, что закон распределения исследуемых числовых показателей отличался от нормального, значимость различий проверена при помощи критерия Вилкоксона (в случае зависимых групп) и U – критерия Манна-Уитни (в случае независимых совокупностей). Различия считались значимыми при p ≤ 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. Результаты проведенного СУОК-теста показали, что в первом опытном сеансе под влиянием недельной коррекции полиоксидонием опытные старые крысы начинали первое перемещение по шесту на 0,5 с. раньше (р = 0,021; z = – 2,305) по сравнению с интактными молодыми особями (табл. 1).

Таблица 1

Показатели поведенческих актов старых крыс, леченных полиоксидонием, в сравнении с интактными старыми (выработка)

Примечания. * – медиана; ** – по Mann-Whitney U-Test статистическая значимость по отношению к старым.

Таблица 2

Показатели поведенческих актов старых крыс, леченных полиоксидонием, в сравнении с интактными старыми (проверка)

Примечания. * – медиана; ** – по Wilkoxon 2 – SampleTest статистическая значимость по отношению к выработке, ** – по Mann-WhitneyU – Test статистическая значимость по отношению к старым.

Под влиянием полиоксидония в 1,5 раза (р = 0,049; z = 1,965) улучшилась горизонтальная активность старых крыс, а также наблюдалось статистически значимое увеличение направленной исследовательской активности на 14,3 % (р = 0,002; z = 3,137), о чем судили по количеству исследовательских актов заглядываний вниз, по сравнению с группой сравнения.

У старых крыс, леченных полиоксидонием, более чем в 2 раза (р = 0,0002; z = – 3,779) сократилось количество совершенных ими остановок по сравнению с нелеченными особями. По сокращению актов соскальзывания лап с шеста на 40 % (р = 0,004; z = – 2,910) по сравнению с нелеченными особями судили о состоянии у них вестибуло-моторной функции. Однако количество соскальзываний задних лап положительно коррелировало (+ 0,71; р < 0,05) с продолжительностью остановок, что свидетельствовало о сохранении у этих крыс моторной дезинтеграции.

Во втором опытном сеансе показатели латентного периода выхода из центральной зоны арены у крыс, леченных полиоксидонием, не отличались от показателей предыдущего срока (табл. 2), между тем, по сравнению с нелеченными особями были на 25 % статистически значимо короче (р = 0,023; z = – 2,267).

Крысы, леченные полиоксидонием, увеличили количество остановок до 10 (интерквартильный размах от 9,0 до 11,0) против 6,5 (интерквартильный размах от 5,0 до 8,0) предыдущего срока (р = 0,007; z = – 2,684), но по сравнению с нелеченными особями они совершали на 16,7 % статистически значимо (р = 0,004; z = – 2,834) меньше остановок.

Во втором опытном сеансе у старых крыс под влиянием полиоксидония наблюдалось снижение горизонтальной и направленной исследовательской активности, которое можно было бы расценить как потерю новизны предъявляемой экспериментальной ситуации или высокой скоростью привыкания. Однако, проведенным корреляционным анализом обнаружена положительная корреляционная связь между количеством заглядываний вниз и соскальзыванием лап (+ 0,81; р < 0,05). Так, эти данные свидетельствовали о том, что количество соскальзываний лап с шеста у экспериментальных животных напрямую зависело от сокращения попыток свешиваний вниз. По-нашему мнению, это и являлось причиной снижения исследовательского интереса в 1,3 раза (р = 0,012; z = – 2,507) у крыс, леченных полиоксидонием, по сравнению с предыдущим сроком исследования.

Корреляционный анализ показал также положительную корреляционную связь между количеством остановок и соскальзыванием лап (+ 0,65; р < 0,05). По-видимому, для предотвращения соскальзывания лап старыми крысами было предпринято большее количество остановок, что является свидетельством сформировавшейся от предыдущего опыта памяти.

Заключение

Таким образом, под влиянием полиоксидония у старых крыс в Суок-тесте уже в первом сроке исследования наблюдалось улучшение параметров исследовательского поведения на фоне снижения тревожно-фобического поведения. Между тем, полиоксидоний не оказывал влияния на мотосенсорную дезинтеграцию поведенческого паттерна старых крыс, что не способствовало нарастанию у них исследовательской активности во втором опытном сеансе.