Существующие в настоящее время методы получения андроклинных гаплоидов в культуре клеток и тканей in vitro подсолнечника являются не эффективными [1]. Для повышения эффективности технологии получения гаплоидных растений-регенерантов предлагаются разные методы оптимизации питательных сред [3]. При приготовлении питательных сред в культуре клеток и тканей in vitro одним из слабоизученных вопросов является подбор растворителей фитогормонов.
Целью наших исследований являлось изучение влияния разных растворителей фитогормона 6-бензилоаминопурина (6-БАП) на процесс каллусогенеза в культуре пыльников in vitro подсолнечника.
Объектами исследований являлись самофертильная линия-реципиент ЮВ-28Б и набор из десяти экспериментальных короткостебельных линий подсолнечника, созданных в генофоне линии ЮВ-28Б методом беккроссов на основе использования разных dw-генов [2, 4].
Донорные растения исследуемых генотипов выращивали в полевых условиях. Корзинки срезали и стерилизовали в течение 15 минут 30 % хлорсодержащим препаратом «Белизна», затем промывали стерильной дистиллированной водой.
В асептических условиях ламинар-бокса вычленяли неокрашенные пыльники, содержащие микроспоры на поздней одноядерной стадии и помещали на питательную среду. Использовали среду Мурасиге-Скуга с добавлением регуляторов роста: β-индолил-3-уксусной кислоты 1 мг/л, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты 2 мг/л, 6-БАП 0,5 мг/л. В качестве растворителя фитогормона 6-БАП использовали щелочь КОН (стандартный метод) и диметилсульфоксид (ДМСО), который повышает проницаемость мембран клеток.
Результаты двухлетнего эксперимента показали, что из одиннадцати линий только у одной наблюдался достоверный положительный эффект на выход каллусов при применении ДМСО в качестве растворителя фитогормона.
Таким образом, поскольку применение ДМСО для приготовления раствора фитогормонов не оказывает однозначного влияния на каллусогенез in vitro и зависит от генотипа донорных растений, то его применение в качестве растворителя фитогормона 6-БАП в культуре пыльников in vitro подсолнечника ограничено.