Длительное применение морфиновых анальгетиков часто сопровождается развитием гиперальгезии и/или морфиновой толерантности. В связи с этим существенный интерес исследователей во всем мире в последнее время связан с изучением механизмов прямого действия опиатов на потенциалзависимые ионные каналы мембран возбудимых клеток и синаптическую пластичность [1, 2, 3, 4]. Нужно отметить, что часть исследователей говорит о блокирующем действии опиатов, в том числе и морфина, на входящий Na-ток [1, 5, 6], другие [7] отрицают наличие у морфина подобного эффекта.
Для изучения действия морфина гидрохлорида на входящие токи через зависящие от напряжения натриевые каналы нами были выбраны клетки нейробластомы мыши С-1300, где опиатные µ-рецепторы практически полностью отсутствуют.
Клетки нейробластомы мыши C-1300 культивировали при 36°С, 5 % СО? в среде, содержащей 75 % DMEM, 25 % IMEM, 5 % эмбриональной телячьей сыворотки, 50 мкг/мл канамицина со сменой среды каждые 2-3 дня. Для эксперимента клеточную суспензию в концентрации 10? клеток/мл высаживали на покровные стекла в 6-луночном планшете, через сутки в среде снижали сыворотку до 2 % и добавляли 1,5 нг/мл BDNF.
Трансмембранные ионные токи регистрировали в клетках нейробластомы С-1300 методом Patch-clamp в конфигурации whole-cell, режим «voltage clamp» при ступенчатом смещении мембранного потенциала от –90 мВ до –20 мВ длительностью 100 мс, удерживаемый потенциал –70 мВ, интервал между «ступеньками» 2 секунды.
Записи делались до применения морфина гидрохлорида и через 2 минуты после добавления раствора морфина во внешний раствор (конечная концентрация 100 мкМ).
Обнаружено, что уже через 2 минуты после применения 100 мкМ морфина гидрохлорида максимальная относительная амплитуда входящего натриевого тока в клетках культуры нейробластомы С-1300 падает до 51.83±19.3 % от контрольной (n=7, p<0.05). За 100 % принималась амплитуда входящего тока до начала действия морфина . Приведенные данные свидетельствуют о наличии у морфина ингибирующего действия на потенциалзависимые натриевые каналы клеток нейробластомы С-1300, причем этот эффект не связан с опиатными µ-рецепторами.