Введение
Иммунная защита организма от опухоли осуществляется как на системном, так и на локальном уровне. Участие в ней клеточных структурных элементов (Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, NК-клеток) и их растворимых продуктов в настоящее время не подлежит сомнению [5, 6, 7]. Однако, хотя феномен инфильтрации опухоли иммунокомпетентными клетками давно известен, их роль в очаге расценивается двояко, т.е. они могут способствовать не только ее регрессии, но и росту, тем более, при распространенных стадиях [1, 2, 8, 12]. Изучение факторов локального иммунитета у онкологических больных представляет собой важную проблему, имеющую теоретические и прикладные аспекты. В частности, не исследовано значение Т-клеток памяти, несмотря на их возможную роль при заболеваниях с рецидивирующим течением, которое характерно для злокачественных опухолей. Поскольку современные методы иммунотерапии, например, с помощью цитокиновых препаратов, а также LАК- и TIL-клеток, адресуются к аутологичным лимфоцитам больных и рассчитаны на их хоуминг, представляется важным углубленное исследование лимфоцитарных субпопуляций крови и других биологических и патологических жидкостей.
Целью данной работы является сравнительная характеристика структурных элементов общего и локального клеточного иммунитета у больных асцитными формами рака яичника.
Материалы и методы
Исследовано 20 парных образцов крови и асцитической жидкости (АЖ), взятых у первично выявленных больных асцитной формой рака яичника (РЯ) в возрасте от 25 до 73 лет со средней продолжительностью анамнеза 7 мес. Группу сравнения составили 20 практически здоровых женщин аналогичного возраста, у которых брали для исследования периферическую кровь.
В крови и АЖ определяли процентное содержание лимфоцитов, моноцитов, гранулоцитов. Среди субпопуляций Т-лимфо-цитов оценивали общее количество СD3+ клеток, CD3+CD4+CD8-, CD3+CD4-CD8+, DN (CD3+CD4-CD8-); кроме того в каждой из основных субпопуляций подсчитывали содержание лимфоцитов с иммунофенотипом, характерным для Т-клеток памяти (CD3+CD4+CD45RO+CD45RA-, CD3+CD8+CD45RO+CD45RA-), и наивных Т-кле-ток (CD3+CD4+CD45RA+CD45RO-CD62L+ и CD3+CD8+CD45RA+CD45RO-CD62L+). Определяли также количество В-лимфо-цитов (СD19+) и NК-клеток (СD16+СD56+). Исследования выполняли с помощью проточного цитофлюориметра BD FACS CantoII и панелей моноклональных антител фирмы BD.
Статистическую обработку данных проводили параметрическими и непараметрическими методами (t-критерий Стьюдента, критерий Уилкоксона, метод непрямых разностей).
Результаты и обсуждение
Результаты представлены в табл. 1-4. В табл. 1 приведена сравнительная характеристика процентного содержания различных лейкоцитарных форменных элементов в крови и в АЖ больных асцитной формой РЯ и здоровых лиц.
Как видно из табл. 1, в крови больных наблюдается ряд отличий от показателей крови здоровых женщин: отмечен статистически достоверно более высокий процент гранулоцитов и более низкий – лимфоцитов. В АЖ больных РЯ определяется повышенное по сравнению с их кровью содержание лимфоцитов и моноцитов при более низком количестве гранулоцитов. Несмотря на вариабельность индивидуальных данных, направленность отличий показателей АЖ от периферической крови больных во всех исследованных пробах была сходной.
Оценка содержания популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток с панелью моноклональных антител Т-В-NК выявила в крови больных РЯ статистически значимо более низкие уровни Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+CD8+ и В-лимфоцитов, а также более высокий – NК-клеток по сравнению с кровью здоровых женщин (табл. 2). Статистически достоверных различий по общему количеству Т-лимфоцитов и их основных субпопуляций, а также по уровням В- и NК-клеток между кровью и АЖ больных не отмечено; при этом количество NК-клеток в АЖ больных характеризовалось наиболее значительной вариабельностью.
Данные, представленные в табл. 3, демонстрируют различия содержания Т-лим-фоцитов с иммунофенотипом Т-клеток памяти и наивных Т-лимфоцитов в крови больных РЯ по сравнению с соответствующими показателями крови здоровых женщин. У больных выявлен статистически достоверно более высокий уровень Т-клеток памяти среди CD3+CD4+ и более низкий уровень наивных Т-лимфоцитов среди CD3+CD8+. Такие различия показаны при исчислении процентного содержания как от общего количества лимфоцитов, так и от каждой из основных субпопуляций. Статистически значимые различия по количеству наивных Т-лимфоцитов и Т-клеток памяти установлены также при сравнении показателей крови и АЖ больных (табл. 3), несмотря на одинаковые уровни основных Т-лимфоцитарных субпопуляций (СD3+СD4+ и СD3+СD8+) в этих биологических жидкостях. Выявлено статистически достоверно более высокое количество Т-клеток памяти в АЖ, чем в крови; процент наивных Т-лимфоцитов в АЖ был соответственно ниже. Такие различия наиболее очевидны при вычислении процента наивных клеток или клеток памяти от каждой из субпопуляций, а не от общего количества лимфоцитов, и показаны как для CD3+CD4+, так и для CD3+CD8+ клеток (табл. 3).
Таблица 1
Состав лейкоцитарных форменных элементов в крови и АЖ больных РЯ
Пробы |
Количество форменных элементов (%) |
||
Лимфоциты |
Моноциты |
Гранулоциты |
|
Здоровые женщины (кровь) |
36,3±2,26 |
7,33±0,48 |
53,5±2,27 |
Больные РЯ (кровь) |
15,5±2,5* |
7,7±0,44 |
73,6±2,6* |
Больные РЯ (АЖ) |
50,4±6,0* ** |
21,5±5,1* ** |
22,3±5,6* ** |
Примечание. * - статистически достоверные отличия от показателей здоровых женщин; ** - статистически достоверные отличия от показателей крови больных (Р<0,05)
Таблица 2
Количество лимфоцитов основных субпопуляций (Т-В- NK-) в крови и АЖ больных РЯ
Пробы |
Количество лимфоцитов, % |
|||||
CD3+ |
CD3+ CD4+ |
CD3+ CD8+ |
DN(CD3+ CD4-CD8-) |
CD19+ |
CD16+ CD56+ |
|
Здоровые женщины (кровь) |
72,5±2,53 |
44,4±1,82 |
24,4±2,7 |
1,89±0,24 |
14,0±1,0 |
12,5±2,54 |
Больные РЯ (кровь) |
67,4±4,1 |
47,2±2,9 |
17,0±2,5* |
1,88±0,36 |
6,6±2,0* |
22,0±2,0* |
Больные РЯ (АЖ) |
71,0±4,54 |
47,9±3,0 |
23,5±3,73 |
2,04±0,38 |
6,8±1,1* |
18,9±5,0 |
Примечание. * - статистически достоверные отличия от показателей здоровых женщин (Р<0,05)
Таким образом, полученные результаты говорят о том, что у больных РЯ Т-клетки памяти, присутствующие в обеих субпопуляциях, концентрируются в асцитической жидкости, т.е., в области очага, а содержание в крови наивных Т-лимфоцитов, принадлежащих как к CD3+CD4+, так и к CD3+CD8+ клеткам, преобладает над их количеством в АЖ.
С целью более подробной характеристики клеточного состава лимфоцитов крови и АЖ нами было вычислено соотношение Тпам./Тнаив.; результаты представлены в табл. 4, наряду с широко известным показателем иммунорегуляторного индекса (CD3+CD4+/CD3+CD8+).
Как видно из табл. 4, соотношение CD3+CD4+/CD3+CD8+ в крови больных РЯ оказалось статистически достоверно выше, чем у здоровых женщин, что связано с более низким содержанием CD3+CD8+ лимфоцитов у больных. Поскольку эти клетки являются предшественниками цитотоксических Т-лимфоцитов, снижение их уровня, по-видимому, отражает истощение соответствующего звена иммунитета. Индекс CD3+CD4+/CD3+CD8+ в АЖ не имеет статистически достоверных отличий от показателя крови больных. Соотношение клеток памяти и наивных лимфоцитов, относящихся к обеим основным Т-клеточным субпопуляциям, было существенно выше в АЖ. Это говорит о выраженном преобладании Т-лим-фоцитов памяти над наивными Т-клетками именно в очаге по сравнению с периферической кровью, хотя пока не представляется возможным установить их специфичность и обосновать предположение об их возможной противоопухолевой активности.
Итак, обнаруженные у больных РЯ изменения показателей иммунного статуса свидетельствуют об угнетении адаптивного иммунитета, о чем говорит снижение в крови уровней CD3+CD8+ и B-лимфоцитов при повышении количества NK-клеток, возможно, компенсаторного.
Сопоставление показателей системного и локального клеточного иммунитета при асцитных формах РЯ продемонстрировало преобладание Т-клеток памяти с субпопуляционными рецепторами CD4 и CD8 у больных по сравнению со здоровыми женщинами, а также в АЖ по сравнению с периферической кровью, что, однако, не препятствует развитию опухоли.
Таблица 3
Количество Т-клеток памяти и наивных Т-лимфоцитов
с фенотипом СD3+СD4+ и СD3+СD8+ в крови и АЖ больных РЯ
Пробы |
Клетки памяти, % |
Наивные клетки, % |
||
CD3+CD4+ |
CD3+CD8+ |
CD3+CD4+ |
СD3+CD8+ |
|
Здоровые женщины (кровь) |
55,0±3,67 24,0±1,52 |
35,0±4,3 8,44±1,06 |
23,4±3,2 10,6±1,8 |
27,7±3,7 6,44±0,9 |
Больные РЯ (кровь) |
69,4±2,85* 31,5±2,24* |
40,0±4,3 7,0±1,9 |
18,3±2,6 7,0±1,0 |
19,7±1,9* 3,5±0,6* |
Больные РЯ (АЖ) |
80,6±2,06* ** 33,7±2,39* |
60,0±3,9 * ** 12,0±2,9 |
8,33±1,44* ** 3,86±0,93* ** |
11,5±1,5* ** 2,16±0,32* ** |
Примечание. * - статистически достоверные отличия от показателей здоровых женщин; ** - статистически достоверные отличия от показателей крови больных (Р<0,05); числитель - % от субпопуляции; знаменатель - % от общего количества лимфоцитов
Таблица 4
Соотношения различных субпопуляций Т-клеток в крови и АЖ больных РЯ
Пробы |
CD3+CD4+/ CD3+CD8+ |
Клетки памяти/Наивные (% от каждой субпопуляции) |
|
CD3+CD4+ |
CD3+CD8+ |
||
Здоровые женщины (кровь) |
2,0±0,23 |
3,37±0,83 |
1,84±0,52 |
Больные РЯ (кровь) |
3,1±0,33* |
8,5±2,52 |
2,2±0,35 |
Больные РЯ (АЖ) |
2,83±0,36 |
18,8±3,9* ** |
8,5±2,47* ** |
Примечание. * - статистически достоверные отличия от показателей здоровых женщин; ** - статистически достоверные отличия от показателей крови больных (Р<0,05)
Более высокое количество моноцитов в АЖ по сравнению с кровью связано с их локальным присутствием в перитонеальной жидкости как в норме, так и при патологии. Опухолевые клетки, находящиеся в АЖ, видимо, активируют их, приводя к гиперпродукции цитокинов, особенно провоспалительных, содержание которых в АЖ при РЯ, как показано нами ранее, многократно превышает их уровни в крови [3]. Цитокины и хемокины вызывают миграцию лимфоцитов в перитонеальную полость, благодаря чему их содержание в АЖ существенно повышается. Преобладание среди них Т-клеток памяти, вероятно, происходит вследствие мобилизации адаптивного звена противоопухолевой защиты. Однако реализации ее эффекторных механизмов, по-видимому, препятствует опухолевая иммуносупрессия, а также направленная миграция в зону опухолевого микроокружения естественных Т-регуляторных клеток, обладающих супрессорной активностью, количество которых по данным литературы в АЖ значительно выше, чем в крови [4]. Макрофаги 2-го типа (М-2), как известно, тоже могут проявлять иммуносупрессивное действие за счет аутокринной продукции VEGF, EGF, TGFß, IL-6, IL-8, IL-10, которые способны вырабатываться и опухолевыми клетками. Гипоксия, развивающаяся в опухолевой ткани, способствует поляризации цитотоксических М-1 в ростостимулирующие М-2 [2, 9, 12], что позволяет рассматривать моноциты АЖ как факторы поддержания опухолевого роста.
Возможно, применение воздействий, направленных на снятие локальной иммуносупрессии и стимулирующих активность Т-клеток памяти, среди которых описаны эффекторные клетки [10, 11], позволило бы добиться их результативного включения в противоопухолевый иммунный ответ с возможностью профилактики локальных рецидивов рака яичника.
Заключение
Иммунный статус больных асцитной формой РЯ характеризуется угнетением СD8 и В-звена по сравнению со здоровыми женщинами. Факторы локального иммунитета у больных представлены высоким количеством моноцитов и лимфоцитов, среди которых преобладают Т-лимфоциты обеих основных субпопуляций с иммунофенотипом клеток памяти.
Библиографическая ссылка
Златник Е.Ю., Неродо Г.А., Бахтин А.В., Новикова И.А., Мкртчян Э.Т., Арджа А.Ю. ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЩЕГО И ЛОКАЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКА // Международный журнал экспериментального образования. – 2014. – № 1-1. – С. 72-75;URL: https://expeducation.ru/ru/article/view?id=4519 (дата обращения: 16.08.2024).